跳转到主要内容

卵母细胞收集过程中卵泡冲洗对体外施肥胚胎发育的影响

抽象的

背景

评估卵母细胞收集期间卵泡冲洗对胚胎发育潜力的影响。

方法

回顾性研究1714例,其中取出卵当日出现困难(重复卵泡冲洗)133例(困难组),对照组1581例(对照组)。比较困难组与对照组恢复的卵母细胞数、2次原核受精(2pn受精)、第3天优质胚胎和第5/6天囊胚利用率。进一步分析两组在次日的胚胎植入、临床妊娠及新生儿结局−3胚胎转移循环。

结果

困难组恢复的卵母细胞数量(9.08±4.65)明显少于对照组(12.13±5.27);P < 0.001; The 2PN-fertilization, day 3 good-quality embryo and blastocyst utilization rates were significantly lower in the difficulty group compared with controls (71.7% vs. 75.7%; 52.7% vs. 56.5%; 31.9% vs. 37.0%, allP< 0.05)。困难组胚胎植入率为53.2%,低于对照组的58.7%,但未达到统计学意义。困难组新鲜胚胎移植周期率低于正常组(51.88% vs. 61.99%,P = 0.026). The pregnancy and live birth rates were similar between the two groups. But the rate of spontaneous miscarriages of the difficulty group was higher than the control group, although not reaching statistical significance. The neonatal outcomes had no statistical difference between the two groups.

结论

卵母细胞回收困难,包括反复冲洗和相应的卵母细胞恢复所需时间的延长,显著降低了这些患者第3天的优质胚胎和囊胚利用率。但困难组与正常组的活产率无显著差异。

背景

经阴道超声引导取卵器是在超声引导下,通过后穹窿插入针至卵巢,取出成熟卵子进行体外受精和胚胎培养的一种技术[12].该方法已成为人类辅助生殖中卵母细胞提取的常规方法,被认为是体外受精和胚胎移植(IVF-ET)中有效、安全且必需的步骤[3.45].影响卵母细胞恢复数量和卵母细胞质量,以及胚胎生长的结果[3.6].在卵母细胞检索的那一天,我们遇到了案例,无论多种成熟的卵泡如何,没有恢复卵母细胞;和获得来自许多成熟卵泡的卵母细胞的卵母细胞数量的病例。这些患者可能会遇到愿望困难,甚至面对操作时间太长,大部分卵泡都反复冲洗[7].高冲洗压力可导致卵泡壁早期破裂,导致卵母细胞损伤。在这项回顾性研究中,对133例在收集卵母细胞当天出现取回困难的患者进行评估。本文对卵母细胞发育潜力、临床及新生儿结局进行了分析。

方法

学习规划

该回顾性研究由南京大学医学院附属鼓楼医院医学伦理委员会批准。所有患者在2017年提供IVF-ET治疗的签署知情同意。

这种回顾性研究包括由于输卵管因子,男性因素或两者而正在进行其常规月经的妇女正在进行他们的第一循环体外施肥(IVF)或ICSI)的循环术(ICSI)。输卵管因子包括单侧或双侧输卵管闭塞,扰动,单侧或双侧Salping切除术或输卵管连接。雄性因子不育症包括寡核苷酸,哮喘症或阻塞性厌氧患者。符合条件的女性为22至35岁,月经周期正常(定义为自发循环长度为21至35天),持续不孕超过1年。妇女患有单侧卵巢切除术病史,复发性自发流产,诊断多囊卵巢综合征,或子宫异常(例如,腺梗死,癌症,颌骨病导管异常,子宫内膜异位症,粘附性肌瘤,子宫内粘附或患有子宫内粘附或疤痕子宫)。如果患有肾病,肾功能异常,深静脉血栓形成的历史,严重贫血,肺栓塞或脑血管事故,妇女也被排除在外。使用核型分型筛选所有夫妇,排除了亚型型异常的那些。

方法

吸出直径> 10mm的每个卵泡。当卵泡似乎在超声扫描上完全塌陷时,针的尖端被引导到卵泡的中心,并且当卵泡似乎完全坍塌时,就被认为是完全的。如果未发现卵母细胞,则将这种初始抽吸物交给胚胎学家,然后用2mL培养基冲洗收集系统(针和附着管)中的死区,直至看到第一级培养基。如果没有发现卵母细胞,则将卵泡冲洗至最多六次。所有回收的卵母细胞均含有至少两次患者被认为是卵母细胞检索难度[478].

本研究共133例患者在第一个卵母细胞取出周期来我中心就诊,在卵母细胞抽吸当天出现取出困难。对照组包括1581例在我中心成功取出卵母细胞的患者。比较两组患者的年龄、体重指数、卵母细胞恢复量、胚胎发育潜力及临床疗效。并根据不同的受精方式,分别比较IVF和ICSI患者的卵母细胞恢复情况、胚胎发育潜力和临床结果。

促排卵和受精:控制性卵巢过度刺激(COH)按照本中心标准方案进行。所有患者采用以下方案进行COH和外源性促性腺激素治疗:长GnRH激动剂方案,激动剂在前一个月经周期黄体中期开始,在月经出血后第二天添加促性腺激素。当卵泡直径达到> 17mm时,使用250 μg人绒毛膜促性腺激素(hCG) (Ovitrelle®,默克雪兰诺,意大利)触发排卵。手术当天根据精子质量进行常规体外受精或ICSI。

胚胎培养:对于体外受精,将回收的卵母细胞培养4 ~ 5 h后,在IVF-30培养基(G-IVF, 10135, vitro - life, Sweden)中添加10%合成血清替代品(Irvine Scientific, Santa Ana, CA)进行受精;授精后16 h的原核鉴定证实了受精。所有胚胎移入G1培养基(G−1, 10,127, vito -life,瑞典)补充10%的合成血清替代品,并使用伊斯坦布尔共识标准进行评估[9].ICSI按ICSI标准方案进行精子注射,授精16 h后经原核鉴定确认受精。所有胚胎转移到G1培养基中,添加10%合成血清替代品,并使用伊斯坦布尔共识标准进行评估[9].第4天至第6天的胚胎在添加10%合成血清替代品的G2培养基(G-2, 10,131, vito -life,瑞典)中培养,并使用伊斯坦布尔共识标准评估胚胎[10]。

妊娠的测定和监测:在新鲜卵裂期胚胎移植后第3天,在胚胎移植后第14天测量血液或尿液中的人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平。阳性患者于术后28天行b超检查,妊娠诊断标准为有无胎囊及原始心脏搏动。

统计分析

采用SPSS 23.0软件进行统计学分析。采用独立样本t检验比较参与者的基线特征和恢复的卵母细胞数量的平均数。的χ2- 最低用于比较2PN-施肥,裂解,第3天高质量的胚胎,击球,胚泡利用,第5天胚泡利用,第6天胚泡利用,胚胎植入和临床妊娠率。测量数据是平均值±SD或%。统计显着性定义为P < 0.05.

结果

卵母细胞提取和胚胎发育结果

1714名试验参与者的基线特征(表1),卵母细胞取出困难组与对照组相似。

表1基线时参与者的特征

在表2与对照组相比,卵母细胞回收困难组的卵母细胞恢复量显著降低,2pn受精率下降,3天优质胚胎和囊胚利用率(特别是5天囊胚利用率)率下降。

表2卵母细胞取出困难组与对照组临床参数比较

两组之间的卵母细胞检索和胚胎发育结果通过不同的施肥类型

根据不同的施肥类型,患者进一步分为IVF和ICSI亚组。在检索难度群体和控制案件之间比较2PN-施肥率和胚胎发育潜力(表3.)。

表3 IVF或ICSI卵母线检索难度群体和对照组之间的临床参数比较

在接受体外受精的个体中,困难组的卵母细胞恢复明显减少,2pn受精率明显降低。困难组第3天优质胚率为54.6%,第5天囊胚利用率为25.1%,分别低于对照组(56.0和29.2%)。

在接受ICSI的病例中,困难组MII期卵母细胞数量显著减少,第3天优质胚胎率和囊胚利用率(包括第5天和第6天)降低。

临床结果

共有69例和980例难度和对照组患者获得了新鲜的第3天胚胎转移。难度组中的胚胎转移循环/卵母细胞检索循环为51.88%,低于对照(61.99%),P= 0.026;平均移植胚胎数分别为1.80±0.41和1.82±0.38。困难组胚胎植入率为53.2%,低于对照组(58.7%),但差异无统计学意义。两组临床妊娠率、活产率、早期流产率差异无统计学意义。(表4)。

表4卵母细胞取出困难组与对照组的临床结果

新生儿结果

新生儿结局见表5.卵母细胞取出困难组出生59例,对照组出生905例。中位胎龄分别为38.22周和37.62周。卵母细胞取出困难组早产(32 ~ 37周)发生率为25.4 %,对照组为27.3% (P < 0.05)。两组新生儿中位出生体重分别为2934.48 g和2851.99 g。两组出生体重(g) < 2500活产率差异无统计学意义。

表5卵母细胞检索难度群和对照组之间的新生儿结果

讨论

体外受精和胚胎移植是指在自然周期内或通过促性腺激素的作用刺激卵泡发育,然后从卵巢中提取成熟的卵子进行体外胚胎培养和胚胎移植的过程[11121314].IVF-ET的第一步是从卵巢中抽吸成熟的卵母细胞[1516].然而,一些患者可能在卵母细胞收集当天遇到困难。其中,有些可能显示出卵母细胞检索失败,因此没有胚胎移植[17].另一些人,经过反复冲洗,可以获得卵母细胞,但适合移植的胚胎数量有限[8].本研究回顾性分析了133例在收集卵母细胞当天遇到困难的患者,评估了获得的卵母细胞数量、胚胎发育、临床和新生儿结局。

人们普遍认为,在体外处理卵子后,情况只会恶化[1819].许多因素,如空气质量、光照、pH值,包括体外操作,可导致卵母细胞质量下降。卵母细胞回收时间长、回收难度大也是影响卵母细胞质量的重要因素[20.21].

目前的研究包括在2017年卵母细胞收集当天经历检索困难的患者,以及具有成功卵母细胞检索(对照组)的患者,比较胚胎发育,临床妊娠的结果和两组之间的新生儿结果。我们还将胚胎发育进行了不同的施肥方法,分析卵母细胞恢复过程可能影响卵母细胞质量和胚胎发育潜力。在接受IVF的情况下,与对照组相比,难度组表现出2PN施肥和第5天胚泡利用率的速率降低。在接受ICSI的情况下,难度组显示MII阶段卵母细胞数量下降,第3天的较低率较低的胚胎和第5天胚泡利用率。

在体外施肥中,优质的胚胎对成功的胚胎植入来说很重要[2223].因此,增加检索到的卵母细胞的量是改善高质量胚胎数的有效途径[17232425].部分患者在采集卵子过程中,由于各种原因,可能出现取回困难,反复冲洗后,最终获得卵母细胞。但反复的冲洗压力可能导致卵泡壁早期破裂,导致卵母细胞损伤。有时,卵母细胞损伤不能通过卵母细胞丘复合体观察到,尽管它已经导致了卵母细胞的某些功能改变[26].如前所述,卵子检索期间的压力增加会导致卵母细胞中的均来活化,表明压力可以改变卵子的生理功能[2].此外,对卵母细胞的反复压力可以促进无菌卵母细胞的形成,但积云细胞对体外成熟至关重要,特别是卵母细胞中的细胞质成熟[27].无卵丘细胞的卵母细胞虽然有核成熟,但由于细胞质成熟受到明显影响,受精后发育潜力有限。这些胚胎很难发育成囊胚,因此临床妊娠率很低[1828].另一方面,卵母细胞提取困难可能表明患者的异常卵母细胞可能比对照组多,部分异常卵母细胞可能反映了遗传异常,这些卵母细胞发育潜能较低[29].

如本文所示,与对照组相比,困难组的卵母细胞利用率明显降低。与对照组相比,回收困难组胚胎植入、胚胎移植周期和临床妊娠率较低。

了解每个启动周期中所有移植的累计分娩率,以评估获得的卵母细胞的整体质量是很好的,但目前还不是所有进行冷冻胚胎移植的患者。所以,我们在这项研究中没有显示这个结果。

总之,在检索困难的患者中,如何提高卵母细胞的收集数量,特别是提高卵母细胞的质量仍然是一个值得更广泛研究的挑战。

结论

在辅助生殖中,高质量的卵子是IVF成功的基本和首要要求[25].增加提取的卵母细胞数量是提高可移植胚胎数量乃至高质量胚胎的有效途径。在卵母细胞提取过程中,反复冲洗和延长卵母细胞恢复时间,明显降低了卵母细胞和胚胎的发育潜力。

数据和材料的可用性

在当前研究期间使用和/或分析的数据集可从合理的请求上从相应的作者获得。

缩写

2 pn:

两个pronuclei

HCG:

人体绒毛膜促性腺激素

ICSI:

氏菌精液注射

试管婴儿:

体外受精

IVF-ET:

体外施肥和胚胎移植

参考文献

  1. 1.

    通过阴道超声指导卵母细胞采集用于体外受精:成功和并发症。超声医学杂志1988;7(7):377-9。

    中科院文章谷歌学术

  2. 2.

    Tan SL, Waterstone J, Wren M, Parsons J.一项前瞻性随机研究,比较单纯抽吸和抽吸和冲洗经阴道超声引导的卵母细胞恢复。58 Fertil杂志。1992;(2):356 - 60。

    中科院文章谷歌学术

  3. 3.

    Brinsmead M ., Stanger J ., Oliver M ., Shumack J ., Raymond S ., Clark L.:腹腔镜和经阴道超声引导的卵母细胞提取用于体外受精的随机试验。体外Fert胚胎移植。1989;6(3):149-54。

    中科院文章谷歌学术

  4. 4.

    没有证据表明从卵子提取到胚胎移植的时间会影响冻结所有策略的活产率。哼天线转换开关。2017;32(2):368 - 74。

    中科院文章谷歌学术

  5. 5.

    van der Gaast MH, Eijkemans MJ, van der Net JB, de Boer EJ, Burger CW, van Leeuwen FE等。成功的第一个体外受精治疗周期的最佳卵母细胞数目。生物医学在线。2006;13(4):476-80。

    文章谷歌学术

  6. 6.

    Sunkara SK, Rittenberg V, Raine-Fenning N, Bhattacharya S, Zamora J, Coomarasamy A.体外受精治疗中卵子数量和活产之间的关系:一项对400 135个治疗周期的分析。哼天线转换开关。2011;26(7):1768 - 74。

    文章谷歌学术

  7. 7.

    他,Balen Ah,Tan SL。对吸气中检出的卵母细胞结果的预期研究与在异常施肥中进行的经阴道超声定向卵母细胞恢复中检出的卵母细胞的结果。br j障碍gynaecol。1992年; 99(10):841-4。

    文章谷歌学术

  8. 8。

    Waterstone JJ, Parsons JH。前瞻性研究探讨经阴道超声引导滤泡抽吸术中滤泡冲洗的价值。Fertil杂志。1992;57(1):221 - 3。

    中科院文章谷歌学术

  9. 9。

    Prados FJ,DEBROCK S,LEMMEN JG,AGERHOLM I.切割阶段胚胎。哼哼。2012; 27(SOPPL 1):I50-71。

    文章谷歌学术

  10. 10.

    Hardarson T, Van Landuyt L, Jones G.胚泡。《中国科学院学报》2012;27(增刊1):

    文章谷歌学术

  11. 11.

    何俊仁,保尔森。体外受精中的改良自然周期。Fertil杂志。2017;108(4):572 - 6。

    文章谷歌学术

  12. 12.

    妇女的职业优先次序与对计划生育的态度和对生殖技术的道德接受有关。哼天线转换开关。2017;32(10):2069 - 75。

    文章谷歌学术

  13. 13.

    钱伯斯GM, Paul RC, Harris K, Fitzgerald O, Boothroyd CV, Rombauts L等。18luck安卓客户端澳大利亚和新西兰的辅助生殖技术:作为成功衡量标准的累积活产率。医学杂志。2017;207(3):114-8。

    文章谷歌学术

  14. 14.

    Haas J, Zilberberg E, Dar S, Kedem A, Machtinger R, Orvieto R.联合应用gnrh激动剂和hCG最终卵母细胞成熟(双触发)在每个排卵前卵泡中提取的卵母细胞数量低的患者中——初步报道。卵巢杂志2014;7:77。

    文章谷歌学术

  15. 15.

    Awonuga A, Waterstone J, Oyesanya O, Curson R, Nargund G, Parsons J.一项前瞻性随机研究,比较不同直径针经阴道超声引导滤泡抽吸。Fertil杂志。1996;65(1):109 - 13所示。

    中科院文章谷歌学术

  16. 16.

    Stanger JD, Yovich JL。卵泡募集决定试管受精的生产率通过胚胎的数量冷冻和随后的转移。再生生物医学在线。2013;27(3):286-96。

    文章谷歌学术

  17. 17.

    中村M, Yamashita Y, Hayashi A, Saito N, Yu M, Hayashi M,等。分析受控卵巢刺激下卵母细胞回收率降低的危险因素。《再版医学生物学》2017;16(1):40-4。

    中科院文章谷歌学术

  18. 18。

    张勇,张永平,张永平,等。体外受精、解释间隔和不良围产期结局的风险。Fertil杂志。2018;109(5):840 - 8。

    文章谷歌学术

  19. 19。

    詹姆斯·E,詹金斯·TG。表观遗传学、不孕症和癌症:未来的发展方向。Fertil杂志。2018;109(1):新。

    文章谷歌学术

  20. 20.

    calhazi - jorge C, De Geyter C, Kupka MS, De Mouzon J, Erb K, Mocanu E等。18luck安卓客户端2013年欧洲的辅助生殖技术:ESHRE从欧洲登记册产生的结果。哼天线转换开关。2017;32(10):1957 - 73。

    中科院文章谷歌学术

  21. 21.

    Cai Q,WAN F,Huang K,张H.在新鲜胚胎转移后检索卵母细胞的数量是否会检测到妊娠?Plos一个。2013; 8(2):E56189。

    中科院文章谷歌学术

  22. 22.

    霍霞,陈丹,何勇,朱伟,周伟,张杰。双酚A与女性不育的关系:基因-环境交互作用的可能作用。中国生物医学工程学报。中国环境科学,2015;12(9):11101-16。

    中科院文章谷歌学术

  23. 23.

    Ji J,Liu Y,Tong XH,Lu L,MA J,Chen Z. IVF治疗中的卵母细胞最佳数量:中国2455年循环分析。哼哼。2013; 28(10):2728-34。

    文章谷歌学术

  24. 24.

    在体外受精过程中获得的卵母细胞数量:有效性和安全性之间的平衡。哼天线转换开关。2018;33(1):58 - 64。

    文章谷歌学术

  25. 25.

    Steward Rg,Lan L,Shah Aa,Yeh JS,Price TM,GoldFarb JM等。卵母细胞数量作为卵巢过度刺激综合征和活产的预测因子:分析256,381体外受精循环。Fertil SteTil。2014; 101(4):967-73。

    文章谷歌学术

  26. 26.

    Pelinck MJ, Hoek A, Simons AH, Heineman MJ, van Echten-Arends J, Arts EG。胚胎质量和特定胚胎特征对正在植入的未选择的胚胎从改良自然周期体外受精。Fertil杂志。2010;94(2):527 - 34。

    文章谷歌学术

  27. 27.

    Artini PG, Tatone C, Sperduti S, D'Aurora M, Franchi S, Di Emidio G等。卵母细胞周围的卵丘细胞表现出与增殖和存活有关的磷酸肌醇1,3激酶/蛋白激酶B (PI3K/AKT)信号基因下调。哼天线转换开关。2017;32(12):2474 - 84。

    中科院文章谷歌学术

  28. 28.

    高德生,李承宪,朴德荣,杨凯明,林志强。卵浆内精子注射周期中提取的未成熟卵母细胞的妊娠和受精潜力。临床实验杂志2015;42(3):118-25。

    文章谷歌学术

  29. 29.

    Rienzi L, Balaban B, Ebner T, Mandelbaum J.卵母细胞。(S1):i2 -i21, 2012。

    文章谷歌学术

下载参考

确认

不适用。

资金

不适用。

作者信息

从属关系

作者

贡献

L-hZ:研究构思和设计,撰写稿件。分析和/或解释数据。FL:数据分析和/或解释。Z-pX:数据分析和/或解释。J-sF:数据采集。研究的构思和设计,数据的获取,对重要的知识内容进行批判性的修改。所有作者阅读并批准最终稿件。

相应的作者

对应到Jun-shun方张扬袁张

道德声明

伦理批准并同意参与

我们的研究议定书由南京大学医学院附属鼓楼医院医学伦理委员会批准。在我们的中心承认的所有患者都同意匿名使用其医疗数据进行科学研究,出版和/或质量评估,并以前在治疗开始时签署了知情同谋。由于该研究旨在回顾性地分析完成治疗的患者的数据,因此不需要进一步同意。

同意出版

不适用。

相互竞争的利益

提交人声明他们没有竞争利益。

附加信息

出版商的注意事项

新利国际娱乐《自然》杂志对已出版的地图和附属机构的管辖权主张保持中立。

权利和权限

开放获取本文在知识共享归属4.0国际许可条款下发布(http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/)如果您向原始作者和源给出适当的信用,则允许在任何介质中进行不受限制的使用,分发和再现,提供指向Creative Commons许可证的链接,并指示是否进行了更改。Creative Commons公共领域奉献豁免(http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/)除非另有说明,否则适用于本文中提供的数据。

重印和权限

关于这篇文章

通过Crossmark验证货币和真实性

引用这篇文章

朱,Lh。,Ni, Xb., Lin, F.et al。卵母细胞收集过程中卵泡冲洗对体外施肥胚胎发育的影响。饲养Biol内分泌17日,106(2019)。https://doi.org/10.1186/s12958-019-0540-5

下载引用

关键字

  • 卵母细胞检索困难
  • 回收的卵母细胞的数量
  • 胚胎发展潜力
  • 囊胚形成