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无标记的蛋白质组学揭示SMC1A表达在AUB-E中下调GydF4y2Ba

抽象的GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

虽然大重月经出血(HMB)是由寻求妇科护理的子宫内膜障碍(AUB-E)引起的子宫出血的女性中患有异常性疾病的普遍存在症状,但原发性子宫内膜障碍仍然明白。GydF4y2Ba

方法GydF4y2Ba

我们分别从AUB-E的女性和年龄匹配的健康女性中选择了5份人类子宫内膜样本。样品中的蛋白质通过基于线性离子阱(LTQ)-轨道阱精英质谱仪的无标记蛋白质组学方法进行分析。目的蛋白经免疫印迹和免疫组化染色验证。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

在高度严格的标准下量化了2353个蛋白质基团,对于蛋白质基团的假发现率<1%,两组之间有291个差异表达的蛋白质显着变化。结果表明,AUB-E患者在染色体蛋白1A(SMC1A)的结构维持下调。接下来,通过免疫组织化学验证腺体上皮细胞的这种变化。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

结果表明AUB-E的形成有一个新的机制,SMC1A的下调可能调控子宫内膜腺上皮细胞周期进程,进而导致出血。GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

子宫异常出血(AUB)是女性最常见的妇科疾病之一,占妇科门诊患者的33%,子宫切除术患者的三分之二[GydF4y2Ba1GydF4y2Ba]。为了满足定义和术语标准化的要求,采用AUB发生的潜在原因和机制的首字母缩写,“PALM-COEIN”分类法自2011年起在国际上广泛使用[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba],已被国际妇科和产科联合会接受(FICO)[GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]。在这个系统中,COEI组涉及的实体不是由成像或组织病理学定义的(“非结构性”)。子宫结构正常且月经周期规律且无凝血功能障碍的AUB-E可能有潜在的子宫内膜原因,即原发性子宫内膜疾病[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]。这种情况通常是通过繁重的月经出血(HMB)的特征,通常以相当规律的间隔,并且每日月经损失模式类似于正常月经,在前3天内发生〜90%的流动[GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba]。尽管AUB-E可能与许多女性有关,但临床可用的特异性检测或生物标志物的缺乏意味着对此类疾病的实际检测尚不可行[GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba,这一问题仍被忽视,AUB-E患者的诊断不足。它发生在所有年龄段的9-14%的妇女中,并导致了大约25%的妇科手术,这是由于医学治疗中普遍适用的方法不足[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba]。然而,一个结构良好的历史和检查通常是有帮助的,没有商业可用的测试。因此,在理解AUB-E的病因和发展生物标志物方面有明确的作用。GydF4y2Ba

随着质谱(MS)领域的快速发展和进步,蛋白质组学已被用于发现生物标志物和回答医学不同方面的多学科科学问题。例如对疾病中受影响的途径的阐明,或预测患此病的高危人群[GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]。直接在蛋白质水平上的表达分析对于揭示作为疾病发病机制一部分发生的关键变化是必要的[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba]。因此,蛋白质组学为研究AUB-E患者的病因提供了非常有用的工具。然而,到目前为止,蛋白质组学分析已用于其他妇科疾病,尚未用于比较差异蛋白表达谱来研究AUB-E的病因[GydF4y2Ba11GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba

本研究对AUB-E患者(E组)与对照组无AUB的子宫内膜健康女性(C组)之间处于增殖期的人子宫内膜组织进行无标记蛋白质组学分析,验证后确定与子宫内膜疾病相关的生物标志物。本研究有望为AUB-E发病机制的进一步研究提供参考。本研究工作流程如图所示。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

图1GydF4y2Ba
图1GydF4y2Ba

本研究的实验设计及工作流程。采用无标记蛋白质组学分析AUB-E患者(E组)与无AUB的子宫内膜健康女性(C组)之间增生期的人子宫内膜组织,研究蛋白质组学变化。通过western blot和免疫组化对鉴定出的潜在蛋白进行验证GydF4y2Ba

材料和方法GydF4y2Ba

患者和对照组GydF4y2Ba

本研究在浙江大学医学院附属女子医院妇科进行。选择标准包括排除任何其他已知的AUB原因的检查,因此严格遵守AUB- e的定义。对所有未怀孕女性进行面对面访谈,获取其详细的病史,包括人口统计学特征、经期及病史,结合妊娠检查、常规血液及凝血检查、经阴道超声检查以排除其他可能的AUB原因。选择标准为在浙江省永久居住,年龄在20 - 40岁之间,通过画报血液评估表(PBAC)评估自我报告HMB [GydF4y2Ba12GydF4y2Ba]。排除有甲状腺功能障碍、糖尿病、高血压、慢性肝、肾疾病、器质性生殖道病变、子宫和卵巢肿瘤、妊娠相关原因、宫内避孕器、子宫内膜异位症、盆腔炎等全身性疾病的女性。在月经周期的增殖期(7-10天;GydF4y2BaN.GydF4y2Ba= 5),仔细检查并记录组织病理细节,分为E组。GydF4y2Ba

对照组选取年龄相近、月经史正常、子宫内膜无异常、腹腔镜绝育后刮除(GydF4y2BaN.GydF4y2Ba= 3),评估输卵管通畅(GydF4y2BaN.GydF4y2Ba= 2)。增生性子宫内膜活检经组织病理学诊断排除子宫平滑肌瘤、子宫内膜异位症、息肉、子宫内膜炎症及恶性肿瘤。所有妇女在过去6个月内均未接受类固醇激素治疗。GydF4y2Ba

样品制备GydF4y2Ba

来自E组(26-37岁,中位数28岁)和C组(27-34岁,28年龄28)的所有子宫内膜组织(28-34岁,28岁)立即转移到实验室中的磷酸盐缓冲盐水(PBS)在冰上。用PBS广泛洗涤样品以除去任何血液,并分为两部分。一部分被送入组织病理学诊断,另一部分储存在-80℃以进行进一步的蛋白质组学或Western印迹分析。子宫内膜活检除去样品冷冻的总持续时间被控制为15分钟。GydF4y2Ba

使用FASP法消化蛋白质消化GydF4y2Ba

将快速冷冻的子宫内膜组织加入SDS裂解缓冲液(2% SDS, 0.1 M DTT, 0.1 M Tris-HCl, pH 7.6),匀浆。离心后(16000GydF4y2BaGGydF4y2Ba4℃× 5 min),将上清液移至新管中,按上述方法重新提取颗粒。混合物在沸水中再孵育5分钟,超声20分钟,16000离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba20°C时,30分钟。收集上清液,用NanoDrop®ND-1000分光光度计测定蛋白浓度。GydF4y2Ba

用FASP程序消化200μg样品,如[GydF4y2Ba13GydF4y2Ba]。每种样品在14000时浓缩 GGydF4y2Ba在30 k Microcon过滤装置(Millipore, USA)中,在20°C条件下× 40分钟。然后,加入200 μL尿素缓冲液(8 M尿素,0.1 M Tris-HCl, pH 8.5),再次离心14 min。这一步又重复了一遍。将浓缩物与100 μL 50 mM碘乙酰胺(IAA)在尿素缓冲液中混合,在室温黑暗下孵育40 min。离心14000 g × 15 min后,用尿素缓冲液200 μL稀释,再离心2次。然后,加入50 mM NH4HCO3 200 μL,再次离心。这一步重复了两次。最后在样品中加入50 μL 50 mM NH4HCO3和胰酶(1:50),37℃孵育过夜。离心收集洗脱后的肽,用50 mM NH4HCO3 40 μL清洗2次,真空干燥。然后按照制造商的说明使用ZipTip C18 (Millipore, USA)进行脱盐,并对样品进行真空干燥。 Finally, peptide digests were resuspended in 10% acetonitrile (ACN) in 0.1% formic acid (TFA) and detected the protein concentration.

质/ MS分析GydF4y2Ba

高效液相色谱(HPLC)用于使用Easy-NLC 1000(Thermo Fisher Scientific,USA)的样品分离,其中二进制缓冲系统由0.1%TFA在0.1%TFA中的0.1%TFA(缓冲液)b)。使用自动取样器将样品装入预柱(20mm×75μm,3μm-c18,Thermo Scientific柱,USA),并通过分析柱分离(150 mm×50μm,2μm-c18,Thermo Scientific柱,美国)以10μl/ min的流速。液相梯度如下:3-8%缓冲液B为0-10分钟,8-20%缓冲液B 10-120分钟,20-30%缓冲液B,120-137分钟,30-90%缓冲液B.137-143分钟,90%缓冲B 143-150分钟。然后通过配有电喷雾电离(ESI)来源的线性离子阱(LTQ)馏分精英质谱仪(Thermo Fisher Scientific,USA)分析分离的肽。在正离子模式中,完全扫描范围GydF4y2Bam / z.GydF4y2Ba300到2000,分辨率60000 (200GydF4y2Bam / z.GydF4y2Ba)。通过碰撞诱导的解离(CID)函数来选择和碎片的最高丰度的前20个前体,并分析在MS / MS中,其中分辨率为15,000,归一化碰撞能量设定为35%。还使用了以下动态排除设置:重复计数1;重复持续时间30秒;排除持续时间60秒。数据是使用Thermo Scientific Xcalibur 2.2软件的数量部分后处理。GydF4y2Ba

数据分析GydF4y2Ba

针对UniProtKB搜索未处理的原始文件GydF4y2Ba智人GydF4y2Ba数据库由188,386个序列组成(GydF4y2Bawww.uniprot.orgGydF4y2Bapeak®Studio 8.0 (Thermo Fisher Scientific)。搜索参数设置为:前驱离子质量公差为10ppm,生产质量公差为0.02 Da。在PEAKS®Studio 8.0中,Carbamidomethyl (C)被指定为固定修饰,Oxidation (M)被指定为动态修饰,acetylylation被指定为n端修饰。最多允许有2个卵裂位点缺失。为了提高分析结果的质量,软件对检索结果进行了进一步的过滤:将识别出的pms(可信度大于99%)和蛋白质(至少含有1种独特的肽)结合起来,错误发现率(FDR)不超过1.0%。对蛋白质定量结果进行统计学分析GydF4y2BaT.GydF4y2Ba以及。AUB-E组与对照组定量差异显著的蛋白(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba将≤0.05和fold change (FC)≥1.5定义为差异表达蛋白(DEPs)。对所有样品进行主成分分析(PCA)。GydF4y2Ba

DEPS的功能分析GydF4y2Ba

利用DEPs对《京都基因和基因组百科全书》(KEGG)进行火山图分析、聚类热图分析和富集分析[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]。使用Cytoscape软件预测来自富集分析的可能途径的蛋白质 - 蛋白质相互作用(PPI)(版本。3.8.0,GydF4y2Bahttps://cytoscape.org/GydF4y2Ba)[GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]。GydF4y2Ba

西方墨点法GydF4y2Ba

Western blot检测C组和e组之间染色体蛋白1A (SMC1A)的结构维护差异表达。简言之,每个组织在RIPA缓冲液和蛋白酶抑制剂混合物中均质10分钟。粗提物超声1 min, 4℃,10000 g × 10 min离心。检测上清蛋白浓度,95°C变性10 min。然后,10 μl样品在12% SDS-PAGE上运行,转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上,室温下用5%牛血清白蛋白(BSA)封闭1小时,并与抗smc1a (ab243875, Abcam, Cambridge, UK) 1:10 000的抗体在4℃下稀释过夜。用Tween 20 (TBST)缓冲盐水洗涤膜后,用山羊产生的抗兔IgG辣根过氧化物酶标记抗体(ab6721, Abcam, Cambridge, UK)孵育1 h;然后,用Super ECL检测试剂获得荧光图像。每一种凝胶都装有一个从5到250 kDa的阶梯,以表示相应凝胶带的分子量。以GAPDH蛋白作为加载对照,对western blot数据进行归一化处理,将带强度除以相应的GAPDH带强度计算SMC1A的归一化丰度。GydF4y2Ba

免疫组织化学GydF4y2Ba

其他标本通过电子医疗系统检索存档标本进行免疫组化(IHC)分析。常规组织学检查使用苏木精和伊红染色确定任何异常。GydF4y2Ba

免疫组化分析:将子宫内膜组织标本石蜡包埋,切成5 μm厚的切片,检测SMC1A (ab243875, Abcam)在子宫内膜中的定位。所有随后的培养都在加湿的室内进行。首先用10%山羊血清(Invitrogen, Eugene)在室温下封闭切片30分钟;然后,用兔抗smc1a抗体(1:200稀释)在4°C下孵育过夜。洗净后,用二抗山羊抗兔(Invitrogen;1:200稀释)1 h。切片冲洗并暴露于二氨基联苯胺(DAB, Sigma)以消除细胞核染色。最后,用Grundium Ocus®扫描仪(Grundium,芬兰)对染色切片进行扫描。GydF4y2Ba

对于每个样品,分别使用图像J软件(国家健康机构,贝塞斯达,马里兰州,美国)中,在腺上皮细胞和基质区域中测定蛋白质表达强度。简而言之,染色的强度为0(阴性),1(弱),2(中等)或3(强),如前所述[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]。使用组织学评分(H-Score)为1×%弱+ 2×%中等+ 3×%强度进行细胞核中免疫阳性的评估。标本由两个独立观察者检查,他是“盲目”的实验条件。GydF4y2Ba

统计分析GydF4y2Ba

数据使用GydF4y2BaT.GydF4y2Ba- 用于两组的方法和组成比的Chi-Square试验。连续和分类变量被描述为平均值±标准偏差(SD)和受试者的数量和百分比。如果连续变量不正常分布,并且显示为中位数(第25百分位数,第75位,第75百分位数),则使用Mann-Whitney U测试。这GydF4y2Bat -GydF4y2Ba测试用于评估腺上皮中的SMC1a表达(H谱)和两组之间的基质区域。GydF4y2BaP.GydF4y2BaSPSS软件(Chicago,IL,版本23.0)并用GraphPad Prism软件(V6.0; GraphPad Software Inc.,San Diego,CA)绘制了统计显着性。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

基线数据分析GydF4y2Ba

收集并分析所有参与者的基线数据。两组在人口统计学和月经特征上无显著差异(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba> 0.05)GydF4y2Ba1GydF4y2Ba。虽然血红蛋白(HB),血细胞比容(HCT)和基线FSH水平没有统计学上显着差异,但流量和月经周期长度(全部)GydF4y2BaP.GydF4y2Ba值> 0.05),两组间PBAC评分差异有统计学意义(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba = 0.000) (see Table2GydF4y2Ba)。GydF4y2Ba

表1所有受试者的人口学特征GydF4y2Ba
表2所有受试者的临床细节GydF4y2Ba

蛋白质识别GydF4y2Ba

实验检测到2353个蛋白质组并量化1921个不同的蛋白质(GydF4y2Ba补充表S1GydF4y2Ba和GydF4y2Ba表S2GydF4y2Ba)。与健康对照组相比,AUB-E患者中有291例DEPs,其中有140个蛋白上调(FC≥1.50,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)和151down-regulated proteins (FC ≤ 0.67,P.GydF4y2Ba< 0.05)(GydF4y2Ba补充表S3GydF4y2Ba),这些是以热图格式呈现GydF4y2Ba补充图。S1GydF4y2Ba。此外,PCA分析和蛋白水平火山图显示在Figs。GydF4y2Ba2GydF4y2Ba和GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

图2GydF4y2Ba
图2.GydF4y2Ba

AUB-E组与对照组之间的PCA分析结果。E:每个蓝色的圆圈代表E组的一个样本,由一个蓝色的块组成;C:每个rad圆代表C组的一个样本,组成一个红色方块GydF4y2Ba

图3GydF4y2Ba
图3.GydF4y2Ba

从子宫内膜组织中量化1921种不同蛋白质的蛋白水平火山图。E/C组蛋白质定量强度的对数比与负对数的比值GydF4y2BaP.GydF4y2Ba的值GydF4y2BaT.GydF4y2Ba-test从5个重复中执行。E: E组子宫内膜组织;C: C组子宫内膜组织;Up:红色蛋白上调(FC≥1.50,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05);Down:绿色的下调蛋白(FC≤0.67,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05)GydF4y2Ba

DEPS的Kegg途径浓缩分析GydF4y2Ba

富集的KEGG分析发现了一些重要的通路:“凋亡”(5个蛋白)、“细胞粘附分子”(2个蛋白)和“细胞周期”(4个蛋白),这些结果表明AUB-E的发生是多种通路功能障碍的结果(如GydF4y2Ba补充表S4GydF4y2Ba)。通过PPI分析,11 deps(MCM3,SMC1A,SKP1,Alcam,TNF受体相关因子,EIF2S1,附睾分泌物分泌物结合蛋白,YWHAZ,LMNB2,HCG_1782202和ITGB1)彼此相互作用,并富集到较大的蛋白质相互作用网络中(图。GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba),包括4个下调蛋白质(椭圆)和7个上调蛋白质(金刚石)。在上调的蛋白质中,TNF受体相关因子和附睾分泌精子结合蛋白均检索来自通用蛋白质资源的相应基因(GydF4y2Bahttps://www.uniprot.org/GydF4y2Ba,UNIPROT)和HCG_1782202(E / C比率:1.79)哪种蛋白质没有相关的商业抗原。同时,UIF2S1(E / C比率:2.23),YWHAZ(E / C比率:1.99),LMNB2(E / C比率:1.97),ITGB1(E / C比率:1.77)被上调。此外,一个下调蛋白质,阿尔卡姆(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 6.71)在E组中几乎没有表达,没有E/C比值。两个下调的核蛋白:SKP1 (E/C ratio: 0.34)和MCM3 (E/C ratio: 0.15)参与细胞周期通路,并与SMC1A (E/C ratio: 0.32)相关,SMC1A是后来的研究中唯一验证的差异表达蛋白。GydF4y2Ba

图4GydF4y2Ba
图4.GydF4y2Ba

通过PPI对参与细胞凋亡、细胞粘附分子和细胞周期通路的11种DEPs进行分析。下调蛋白(椭圆形)和上调蛋白(菱形)用基因/蛋白名称命名,箭头的宽度与这些蛋白之间的关系评分有关GydF4y2Ba

用免疫印迹和免疫组化验证生物标志物GydF4y2Ba

对于验证目的蛋白,通过在上述样品中通过Western印迹分析SMC1A蛋白(图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba)。比较两组之间的SMC1A表达水平,SMC1A在e组中表达低(GydF4y2BaP.GydF4y2Ba在蛋白质组学分析中观察到相同的表达模式之后= 0.0009)。此外,通过在上述分类标准之后通过电子医疗系统检索每组的其他10名患者(表S5)。SMC1A的免疫组织化学染色主要在子宫内膜的腺上皮细胞中表达,部分在基质区域中(图。GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba)。此外,AUB-E组的腺上皮细胞中SMC1A表达的h评分也同样显著降低(184±31.60 vs. 77±15.43,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.0001),而子宫内膜基质细胞中无显著性差异(见图。GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba)。GydF4y2Ba

图5GydF4y2Ba
图5.GydF4y2Ba

Western blot分析显示来自对照和AUB-E受试者的SMC1A蛋白。(a) SMC1A蛋白的Western blot分析。以GAPDH作为加载对照。(b)定量检测AUB-E组SMC1A蛋白表达水平明显降低。数据以平均值±标准差表示。这GydF4y2BaT.GydF4y2Ba- 最低使用GydF4y2Ba

图6GydF4y2Ba
图6.GydF4y2Ba

人子宫内膜SMC1A蛋白免疫组化染色。(a) C组;(b) e组。左下矩形为阴性对照。(原放大倍数× 100)GydF4y2Ba

图7GydF4y2Ba
图7.GydF4y2Ba

两组腺上皮细胞中SMC1A表达的H次评分(GydF4y2BaN.GydF4y2Ba = 10). TheT.GydF4y2Ba- 最低使用GydF4y2Ba

讨论GydF4y2Ba

虽然AUB是妇科就诊妇女的普遍症状,但月经及其紊乱情况下的子宫内膜功能仍未完全了解[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba]。目前,AUB-E的诊断依赖于仔细的病史记录和排除其他因素[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]。被认为是由子宫内膜功能缺陷或过量的蛋白质或其他实体对止血,正常血管生成,血管完整性或子宫内膜修复产生不利影响的局部干扰引起的GydF4y2Ba2GydF4y2Ba那GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba]。然而,AUB-E的贡献并没有被完全理解,特别是在应用了“PALM-COEIN”分类系统之后。在本研究中,我们将重点放在蛋白质组学分析上,作为识别可能参与发病机制的蛋白质的有力工具,假设功能重要的蛋白质变化将识别与子宫内膜疾病(AUB-E)相关的生物标志物。GydF4y2Ba

在临床实践中,HMB的诊断、评估和治疗是基于“患者经验”,即女性对其失血量的评估及其对其生活的影响[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba19GydF4y2Ba那GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba]。因此,PBAC与自我报告的患有过度血液损失的妇女的生活质量问题相结合,用于评估我们研究中的月经失血量。虽然Hb和HCT水平在两组之间没有显着差异,但2名患者呈现贫血和集团组中的所有科目抱怨表中PBAC分数差异的情况GydF4y2Ba2GydF4y2Ba和GydF4y2Ba补充表S5GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

既往研究表明,如果患者出现HMB症状,可能存在调控局部子宫内膜“止血”本身机制的原发性障碍。其他原发性子宫内膜疾病可能不表现在HMB,但引起月经间期或延长出血。长期出血可能是子宫内膜修复分子机制缺陷的表现[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]。需要注意的是,过去发表的AUB相关研究一般集中在以前的术语“功能失调性子宫出血”,这可能与AUB的其他原因相混淆[GydF4y2Ba2GydF4y2Ba]。因此,这些研究的结果有限。在本研究中,E组的所有参与者被排除在AUB的其他贡献者之外,并在HMB情况下自报告可预测的周期性排卵周期。用PCA分析来反映两组之间的总差异和各组间的变异性。值得注意的是,在我们的研究中,这两组被很好地区分为两个组。同时,对原木蛋白水平的火山图进行了分析GydF4y2Ba2GydF4y2BaFC和呢GydF4y2BaP.GydF4y2BaAUB-E和对照组之间的值如图2所示。GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba这和正态分布很相似。这些结果表明,这个实验程序没有对不同的样本进行明显的偏向。GydF4y2Ba

SMC1A,SMC超家族和核心结构组分的核心综合体的成员,对于姐妹染色体凝聚力,DNA重组和修复,细胞周期调节,基因组稳定性维持和肿瘤术,至关重要[GydF4y2Ba21GydF4y2Ba那GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]。然而,没有关于人体子宫内膜中的SMC1a表达或任何妇科疾病的相关研究,这些疾病限制了这种疾病中SMC1A的功能。在这项研究中,我们的研究结果表明,AUB-E妇女的SMC1A表达增殖相结合体中的表达明显低于健康女性。它可以指示SMC1A影响子宫内膜修复的功能的Aub-e的起源。GydF4y2Ba

子宫内膜是形态学的分为功能和基础层。在子宫内膜修复和增殖期间,在子宫内膜的功能层中发生有丝分裂,是由基质支持的腺体组成的高活性层[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba]。其他20个样品中的免疫组织化学分析表明,主要位于腺上皮细胞中的SMC1a表达的变化,这表明月经后的子宫内膜重塑的紊乱可能是在AUB-E之后。虽然对子宫内膜上皮细胞中SMC1A的研究缺乏研究,但SMC1A敲低似乎与先前报告中的人乳腺癌,肺,前列腺和结肠直肠癌细胞中的细胞周期骤停和/或增加的细胞凋亡相一致[GydF4y2Ba24GydF4y2Ba那GydF4y2Ba25GydF4y2Ba,表明SMC1A蛋白可能影响细胞增殖,抑制细胞凋亡,调节细胞周期进程[GydF4y2Ba26GydF4y2Ba那GydF4y2Ba27GydF4y2Ba那GydF4y2Ba28GydF4y2Ba]。在这里,富集的KEGG通路分析显示,SMC1A在参与细胞周期通路的AUB-E组中表达下调。SMC1A在增殖期的动态可能与调节子宫内膜局部“止血”的腺上皮细胞的细胞增殖和/或凋亡增加密切相关,从而导致HMB。不幸的是,在我们的研究中,PPI分析中与SMC1A蛋白的交互蛋白没有得到证实。GydF4y2Ba

限制GydF4y2Ba

本研究的主要限制是少量样品。因此,任何提出的生物标志物都必须对来自多个位点的足够大的样品群体进行分析。需要进行额外的研究,分子功能研究表明SMC1A的生理作用并提供机械洞察力。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

鉴于AUB的流行,有一个明确的需要了解AUB的成因,以提供最佳的结果,个性化和个性化的诊断和护理。本研究首次采用无标记蛋白质组学策略,比较AUB-E组和对照组人增殖期子宫内膜的蛋白质组学,以满足迫切的生物医学和研究需要。对291个DEPs进行KEGG富集分析,发现SMC1A在参与细胞周期通路的子宫内膜组织中下调。进一步的western blotting和免疫组化分析证实,AUB-E患者子宫内膜腺上皮细胞中SMC1A的下调可能表明,SMC1A可能在子宫内膜重塑过程中抑制了上皮细胞的增殖,从而导致HMB的发生。虽然有一些局限性,但本研究提供了AUB的原因和SMC1A在AUB- e患者中的潜在机制的最新信息,这对于提高妇女健康相关的生活质量至关重要。GydF4y2Ba

数据和材料的可用性GydF4y2Ba

支持本文结论的数据集包含在文章及其附加文件中。GydF4y2Ba

缩写GydF4y2Ba

aub:GydF4y2Ba

异常尿道出血GydF4y2Ba

菲戈:GydF4y2Ba

国际妇产科联合会GydF4y2Ba

女士:GydF4y2Ba

质谱分析。GydF4y2Ba

PBAC:GydF4y2Ba

图案血液评估图。GydF4y2Ba

PBS:GydF4y2Ba

磷酸盐。GydF4y2Ba

津贴:GydF4y2Ba

filter-aided样品制备。GydF4y2Ba

国际宇航科学院:GydF4y2Ba

碘乙酰胺。GydF4y2Ba

可以:GydF4y2Ba

乙腈。GydF4y2Ba

组织:GydF4y2Ba

甲酸。GydF4y2Ba

HPLC:GydF4y2Ba

高效液相色谱。GydF4y2Ba

LTQ:GydF4y2Ba

线性离子阱。GydF4y2Ba

罗斯福:GydF4y2Ba

虚假发现率。GydF4y2Ba

舰队指挥官:GydF4y2Ba

折叠变化。GydF4y2Ba

DEPs:GydF4y2Ba

差异表达蛋白质。GydF4y2Ba

主成分分析:GydF4y2Ba

主要成分分析。GydF4y2Ba

Kegg:GydF4y2Ba

京都基因和基因组百科全书。GydF4y2Ba

PPI:GydF4y2Ba

蛋白质相互作用。GydF4y2Ba

SMC1A:GydF4y2Ba

染色体蛋白1a的结构维护。GydF4y2Ba

PVDF:GydF4y2Ba

聚偏二氟乙烯。GydF4y2Ba

BSA:GydF4y2Ba

牛血清白蛋白。GydF4y2Ba

TBST:GydF4y2Ba

tris缓冲盐水和Tween 20。GydF4y2Ba

SD:GydF4y2Ba

标准差。GydF4y2Ba

h值:GydF4y2Ba

组织学得分。GydF4y2Ba

Hb:GydF4y2Ba

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血细胞比容GydF4y2Ba

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致谢GydF4y2Ba

作者感谢所有参与本研究的主题。此外,我们感谢所有技术人员对本研究的合作和贡献。GydF4y2Ba

资金GydF4y2Ba

这项工作得到了浙江省科技科技部GydF4y2Ba(2019 c03026)。GydF4y2Ba

作者信息GydF4y2Ba

从属关系GydF4y2Ba

作者GydF4y2Ba

贡献GydF4y2Ba

YXJ参与了研究的设计,进行了实验,并撰写了论文。YBL、CML、LJM参与了数据的获取和临床样本的收集。JL和FR分析并进行统计学分析。XMZ参与了研究的设计。JHZ在学习和协调中构思并协助撰写稿件。所有作者阅读并批准最终稿件。GydF4y2Ba

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对应于GydF4y2Ba飞阮GydF4y2Ba或GydF4y2Ba建红洲周GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

道德声明GydF4y2Ba

伦理批准和同意参与GydF4y2Ba

本研究经位于中国浙江省杭州市的浙江大学医学院妇女医院伦理委员会审查批准,并获得伦理许可(GydF4y2Ba20180200号GydF4y2Ba)。从所有科目获得知情同意书。GydF4y2Ba

同意出版物GydF4y2Ba

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利益争夺GydF4y2Ba

作者们宣称他们没有相互竞争的利益。GydF4y2Ba

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新利国际娱乐Springer Nature在发表地图和机构附属机构中的司法管辖权索赔方面仍然是中立的。GydF4y2Ba

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所有人子宫内膜样本的定量蛋白组。GydF4y2Ba

附加文件2:补充表S2。GydF4y2Ba

AUB-E和对照组子宫内膜中不同的蛋白质。GydF4y2Ba

附加文件3:补充表S3。GydF4y2Ba

用Aub-e对控制的人体子宫内膜中的DEP。GydF4y2Ba

附加文件4:补充表S4。GydF4y2Ba

富集Kegg路径分析DEPS。GydF4y2Ba

附加文件5:补充表S5。GydF4y2Ba

其他进行免疫组化的受试者的临床细节。GydF4y2Ba

补充文件6:补充图S1。GydF4y2Ba

Aub-e和控制之间的DEPS的热图。GydF4y2Ba

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开放获取GydF4y2Ba本文是基于知识共享署名4.0国际许可,允许使用、共享、适应、分布和繁殖在任何媒介或格式,只要你给予适当的信贷原始作者(年代)和来源,提供一个链接到创作共用许可证,并指出如果变化。本文中的图像或其他第三方材料包括在文章的创作共用许可中,除非在材料的信用线中另有说明。如果材料没有包含在文章的创作共用许可证中,而您的预期使用不被法律法规允许或超过允许的使用,您将需要直接获得版权持有人的许可。如欲浏览本许可证的副本,请浏览GydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/GydF4y2Ba。“创作共用公共领域”豁免书(GydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/GydF4y2Ba)适用于本文中提供的数据,除非另有用入数据的信用额度。GydF4y2Ba

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贾依,罗洁,兰依。GydF4y2Baet al。GydF4y2Ba无标记的蛋白质组学揭示SMC1A表达在AUB-e中下调。GydF4y2Ba天线转换开关性杂志GydF4y2Ba19日,GydF4y2Ba35(2021)。https://doi.org/10.1186/s12958-021-00713-4GydF4y2Ba

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  • 异常尿道出血GydF4y2Ba
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