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LINC00477 / miR-128轴通过调节卵巢粒细胞增殖和细胞凋亡来促进多囊卵巢综合征的进展GydF4y2Ba

摘要GydF4y2Ba

背景GydF4y2Ba

长链非编码rna (lncRNAs)参与了多种人类疾病的发病机制。本研究旨在探讨lncRNA LINC00477在多囊卵巢综合征(PCOS)中的作用,特别是LINC00477对人颗粒细胞增殖和迁移的影响及其机制。GydF4y2Ba

方法GydF4y2Ba

采用qRT-PCR方法检测LINC00477在PCOS患者血清和PCOS动物模型中的表达谱。MTT法和流式细胞术检测LINC00477对卵巢颗粒细胞活力和凋亡的影响。通过生物信息学分析、双荧光素酶报告基因和RNA下拉分析验证了LINC00477与miR-128之间的相关性。最后,我们进行挽救实验来分析LINC00477-miR-128轴对颗粒细胞生物学行为的影响。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

在PCOS患者和PCOS小鼠模型中,LINC00477表达显著上调。过表达LINC00477可抑制颗粒细胞增殖,促进颗粒细胞凋亡,而敲除LINC00477则相反。此外,miR-128模拟物部分消除了LINC00477对颗粒细胞的影响。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

LINC00477可能作为ceRNA通过调节miR-128的表达来抑制颗粒细胞的增殖和凋亡。GydF4y2Ba

介绍GydF4y2Ba

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种具有高发病率的常识诊断性疾病,PCOS也是全球不孕症的主要原因之一GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2Ba2GydF4y2Ba那GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba]。PCOS的发病机制尚不清楚,给该病的早期诊断和治疗带来困难[GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba6.GydF4y2Ba]。因此,进一步探索PCOS的潜在机制并发展新方法以提高疾病治疗疗效的新方法具有重要意义。GydF4y2Ba

近年来,对不同疾病中非编码RNA的角色的研究已成为一个热门领域。长度非编码RNA(LNCRNA)是非编码RNA系列的成员,并且LNCRNA通常大于200个核苷酸。一些lncrnas是长度的千杆菌[GydF4y2Ba7.GydF4y2Ba]。随着对lncRNAs潜在机制的深入研究,研究者发现lncRNAs可以通过在转录后水平上影响基因表达来调控细胞增殖、迁移、分化等多种生物事件[GydF4y2Ba8.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba9.GydF4y2Ba]。在致癌发生的情况下,LNCRNA参与许多类型疾病的发病机制[GydF4y2Ba10GydF4y2Ba那GydF4y2Ba11GydF4y2Ba那GydF4y2Ba12GydF4y2Ba那GydF4y2Ba13GydF4y2Ba],包括PCOS [GydF4y2Ba14GydF4y2Ba那GydF4y2Ba15GydF4y2Ba]。然而,具体的潜在机制仍不清楚。GydF4y2Ba

长基因间非蛋白编码RNA 477 (LINC00477)是最近发现的一种lncRNA [GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]。在最近的测序分析中,LINC00477被确定为PCOS患者中上调最显著的lncrna之一[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba];然而,其根本机制尚不清楚。在本研究中,我们通过一系列分析进一步探讨了LINC00477在PCOS中的作用。我们的研究结果可能为多囊卵巢综合征的治疗提供一个潜在的新靶点。GydF4y2Ba

方法GydF4y2Ba

研究设计GydF4y2Ba

首先,我们采用qRT-PCR方法检测了LINC00477在PCOS患者血清样本和PCOS动物模型中的表达。此外,通过生物信息学分析、双荧光素酶报告基因和RNA下拉分析验证了LINC00477与miR-128之间的相关性。MTT法和流式细胞术检测LINC00477-miR-128轴对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。GydF4y2Ba

患者和临床样本GydF4y2Ba

采集2019年1月至2020年2月南方医科大学深圳医院PCOS患者及健康对照者血清90份。所有患者均经病理诊断为多囊卵巢综合征,本研究排除有其他重症病史的患者。术后立即将血清标本用液氮保存至分析。每位患者均获得知情同意。本研究经南方医科大学深圳医院伦理委员会批准。GydF4y2Ba

PCOS小鼠模型的建立GydF4y2Ba

BALC/小鼠雌性24只,随机分为PCOS组和健康组,每组12只。皮下注射硫酸脱氢表雄酮(DHEA)诱导多囊卵巢综合征20 d。然后处死小鼠,采集卵巢和血清标本。样品在需要时保存在液氮中。动物实验经南方医科大学深圳医院伦理委员会批准。GydF4y2Ba

原位杂交染色GydF4y2Ba

PCOS和对照小鼠卵巢石蜡包埋样品采用原位杂交(ISH)方法(BOSTER,中国武汉),按照说明书检测lncRNA LINC00477的表达。简单地说,首先将样品放在包含lncRNA LINC00477探针的杂交溶液中,在42°C下过夜。第2天,样品洗净后在37℃下用生物素标记的抗地高辛抗体孵育1 h。最后再次洗涤,37℃下用生物素过氧化物酶孵育30 min。最后,加入四盐酸二氨基联苯胺(DAB)溶液染色,用光学显微镜拍摄图像。GydF4y2Ba

细胞培养GydF4y2Ba

人颗粒细胞购于中国武汉Procell生命科技有限公司。颗粒细胞在RPMI-1640培养基(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)中培养。培养基中添加10%胎牛血清(FBS, Fisher, NY, USA)、青霉素100单位/ml、链霉素100 μg/ml, 37℃,5% CO培养GydF4y2Ba2GydF4y2Ba和95%的湿度。GydF4y2Ba

转染GydF4y2Ba

LINC00477过表达质粒由上海健恩制药有限公司合成。使用Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)按照制造商的说明转染颗粒细胞LINC00477 siRNA。RT-qPCR检测转染效率。GydF4y2Ba

RT-qPCRGydF4y2Ba

miRNeasy Mini试剂盒(Qiagen, Valencia, USA)按照制造商的说明从组织和细胞中提取总RNA。使用NanoDrop 2000 (Thermo Fisher, Wilmington, USA)测定rna的浓度和质量。使用TransScript First-strand cDNA Synthesis Supermix (Transgen, Beijing, China)按照说明书合成第一链cDNA。简单地说,配制20 μl反应溶液,包含5 μg RNA, 1 μl随机引物,10 μl 2x TS反应混合物,1 μl TransScript®RT /RI酶混合物和RNase-free水,25℃孵育10 min。42°C孵育30 min, 85°C孵育5 min,使酶失活。接下来,使用SYBR green qPCR Supermix (Applied Biosystems Life Technologies, Foster, USA)在ABI Prism 7500序列检测系统(Applied Biosystems Life Technologies, Foster, USA)中进行RT-qPCR检测。50μl PCR反应的解决方案包含25μl SYBR®绿色™qPCR SuperMix,底漆1μl, 1μl反向引物,5μl模板以及18μl DEPC-treated水准备,和PCR条件如下:55°C 10分钟紧随其后40 95°C的周期30年代,55-59为42°C 30年代和72°C。利用2GydF4y2Ba——ΔΔCtGydF4y2BamiRNA和lncRNA表达水平分别用U6和GAPDH进行归一化处理。引物序列为:LINC00477,正向引物5’- CGGGATCCAGTCTCTTCTTGCAAGGCCTTTCGC-3’;反向引物,5’- GAATTCCGACCTTAGCCTATTTTCATAAGGC-3’。GAPDH,正向引物5 ' - tgtgggcatcaatggatttg -3 ';反向引物5“-ACACCATGTATTCCGGGTCAAT-3”。miR-128,正向引物,5 ' - gccggcgcccgagctctcggctc -3 ';反向引物5“-TCACAGTGAACCGGTCTCTTT-3”。U6,正向引物5’- aaagcaaatcatcggacgac -3’;反向引物5“-GTACAACACATTGTTTCCTCGGA-3”。GydF4y2Ba

细胞增殖测定GydF4y2Ba

采用5-二苯基四唑鎓溴(MTT)测定来检查不同组的颗粒细胞增殖。简而言之,将细胞接种在96孔板(5×10GydF4y2Ba3.GydF4y2Ba/孔)并在培养箱中用100μl0.5mg/ ml MTT温育4小时,沉淀沉淀物在150μl二甲基磺砜(DMSO)中。在摇动10分钟后评价每个孔的光学密度值。GydF4y2Ba

流式细胞术分析GydF4y2Ba

转染48小时后,收集不同组细胞,分别与5 μl annexin - v -荧光素异硫氰酸酯(FIPCOS)和2.5 μl碘化丙啶(PI)混合。使用FACSAria Sorter (Becton Dickinson, San Jose, USA)检测细胞凋亡。凋亡细胞散点图分布如下:Q3为早期凋亡细胞(FIPCOS+/PI-), Q2为晚期凋亡细胞(FIPCOS+/PI+)。凋亡率以Q3 + Q2细胞数除以总细胞数计算。GydF4y2Ba

荧光素酶活性测定GydF4y2Ba

LINC00477 cDNA片段包括microRNA结合位点,克隆到PMILGLO质粒(Promega,Madison,USA)中。突变体LINC00477(PMIRGLO-DGCR5-MUT)也被产生为对照。使用Lipofectamine 2000,将荧光素酶报告质粒和MiR-128模拟物与MiR-128模拟物分为293个细胞。转染后48小时,通过使用双荧光素酶报告系统(Promega)通过发光测定检查相对荧光素酶活性。GydF4y2Ba

统计分析GydF4y2Ba

数据以均数±标准差表示。两组或多组间的比较分别采用学生t检验或单因素方差分析进行检验。GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05为差异有统计学意义。采用SPSS 13.0 (Chicago, IL, USA)进行统计学分析。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

PCOS患者血清中LINC00477表达增加GydF4y2Ba

首先,收集了90名患者血清样品和健康对照,并比较了PCOS患者血清样品中LINC00477的表达和健康对照。我们发现,与健康对照相比,PCOS患者的血清中,LINC00477表达明显增加。PCOS患者血清的LINC00477水平比健康对照患者高出3.3倍(图。GydF4y2Ba1GydF4y2Ba那GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001)。GydF4y2Ba

图。1GydF4y2Ba
图1GydF4y2Ba

PCOS中LINC00477表达增加。LINC00477在PCOS患者及健康对照组血清中的表达* * *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001 vs .正常对照GydF4y2Ba

PCOS小鼠模型中LINC00477表达增加GydF4y2Ba

接下来,我们还利用小鼠PCOS模型在体内探索了LINC00477在PCOS中的作用。PCOS和对照小鼠卵巢ISH染色如图所示。GydF4y2Ba2GydF4y2Baa. LINC00477在PCOS小鼠卵巢中过表达。RT-qPCR分析小鼠卵巢和血清中LINC00477水平。LINC00477在两种卵巢中均显著升高(图。GydF4y2Ba2GydF4y2BaB,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001)和serum (Fig.2GydF4y2BaC,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001)of PCOS mice compared with the control mice. The level of LINC00477 is about 2.3 times higher in ovarium and 3.3 times higher in serum of PCOS mice than in the controls.

图2GydF4y2Ba
figure2GydF4y2Ba

PCOS体内LINC00477表达增加。GydF4y2Ba一种GydF4y2BaPCOS和对照小鼠卵巢中LINC00477的ISH染色。LINC00477在两个卵巢中均过表达(GydF4y2BaB.GydF4y2Ba)和血清(GydF4y2BaCGydF4y2Ba),并与对照组进行比较。* * *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 00.01 v.s. control mice

LINC00477在体外对颗粒细胞增殖和凋亡有影响GydF4y2Ba

为了研究LINC00477在调节颗粒细胞增殖和凋亡中的作用,我们用过表达LINC00477质粒或siRNA处理细胞,转染效率见图。GydF4y2Ba3.GydF4y2Baa.与空载体转染细胞相比,过表达LINC00477组的LINC0047水平增加了5倍以上;另一方面,si-LINC00477 1# (Fold change 0.26 v.s. 1, si-LINC00477 1# v.s. si-NC)和2#(Fold change 0.34 v.s. 1, si-LINC00477 1# v.s. si-NC)与si-NC组相比,显著降低了LINC00477水平。同时检测细胞增殖和凋亡情况。我们发现,LINC00477过表达质粒在48 h时显著抑制了颗粒细胞的增殖(图。GydF4y2Ba3.GydF4y2BaB,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 0.01) and 72 h (OD 490 0.80 v.s. 1.41, LINC00477 v.s. vector, Fig.3.GydF4y2BaB,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01),促进细胞凋亡(凋亡率27.13 v. 10.07, LINC00477 v.s载体,图。GydF4y2Ba3.GydF4y2BaD,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 0.01) in vitro, whereas knockdown of LINC00477 promoted granulosa cell proliferation at 24 h (OD 490 0.58 v.s. 0.32, si-LINC00477 1# v.s. si-NC, Fig.3.GydF4y2BaC,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05), 48 h (OD 490 0.91 v.s. 0.43, si-LINC00477 1# v.s. si-NC,图。GydF4y2Ba3.GydF4y2BaC,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 0.01) and 72 h (OD 490 1.04 v.s. 0.50, si-LINC00477 1# v.s. si-NC; 0.84 v.s. 0.50 si-LINC00477 2# v.s. si-NC; Fig.3.GydF4y2BaC,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 0.01) and inhibited apoptosis (Apoptosis rate 4.18 v.s. 10.03, si-LINC00477 1# v.s. si-NC; 3.76 v.s. 10.03, si-LINC00477 2# v.s. si-NC, Fig.3.GydF4y2BaD,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)。由于si-LINC00477 1#表现出了更好的效果,因此我们在接下来的实验中使用了si-LINC00477 1#。GydF4y2Ba

图3.GydF4y2Ba
图3GydF4y2Ba

LINC00477过表达质粒和siRNA体外对颗粒细胞增殖和凋亡的影响GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba转染效率。GydF4y2BaB.GydF4y2Ba-GydF4y2BaCGydF4y2BaMTT法测定颗粒细胞的增殖。GydF4y2BaD.GydF4y2Ba流式细胞术检测颗粒细胞凋亡。* *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01 v.s vector, ***GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001 vs .向量,#GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 0.05 v.s. si-nc, ##P.GydF4y2Ba< 0.01 v.s. si-nc, ###GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001v.s. si-nc

MiR-128是LINC00477的目标GydF4y2Ba

接下来,我们探讨了LINC00477在PCOS中的作用机制。首先,通过生物信息学分析,将miR-128鉴定为LINC00477的靶标(图1)。GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba一种)。接下来,通过RT-QPCR检查PCOS患者血清中miR-128的表达。与对照相比,PCOS患者血清中miR-128水平显着降低(折叠变化0.49 V.S.1,PCOS V.S.健康对照,图。GydF4y2Ba4.GydF4y2BaB,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)。此外,相关分析结果表明,LINC00477和MIR-128的血清水平负相关(图。GydF4y2Ba4.GydF4y2BaC,GydF4y2BaR.GydF4y2Ba=−0.2765,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba= 0.0083)。此外,检测PCOS小鼠卵巢和血清中miR-128的水平。miR-128在卵巢中下降(Fold change 0.31 vs . 1, PCOS小鼠vs . control小鼠,图。GydF4y2Ba4.GydF4y2BaD,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)和血清(Fold change 0.4 vs . 1, PCOS小鼠vs .对照小鼠,图。GydF4y2Ba4.GydF4y2Bae,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)。GydF4y2Ba

图4.GydF4y2Ba
装具GydF4y2Ba

miR-128是LINC00477的靶标。GydF4y2Ba一种GydF4y2Ba生物信息学分析结果显示LINC00477和miR-128的3 ' -UTR结合区域。GydF4y2BaB.GydF4y2BaPCOS患者血清中miR-128水平的比较(GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 90)和健康控制(GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 90)。GydF4y2BaCGydF4y2BaPCOS患者血清中miR-128与LINC00477水平的相关性GydF4y2BaD.GydF4y2Ba对照组卵巢中miR-128水平的比较(GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 12)和PCOS (GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 12)老鼠。GydF4y2BaE.GydF4y2Ba对照组血清中miR-128水平的比较(GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 12)和PCOS (GydF4y2BaNGydF4y2Ba= 12)老鼠。GydF4y2BaFGydF4y2BaLINC00477和si-LINC00477对颗粒细胞中miR-128表达的影响GydF4y2BaGGydF4y2Ba双荧光素酶分析结果。GydF4y2BaHGydF4y2BaRNA下拉分析结果。* *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01, * * *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001。每个细胞实验(GydF4y2BaFGydF4y2Ba-GydF4y2BaHGydF4y2Ba),至少重复3次GydF4y2Ba

接下来,检测LINC00477过表达质粒和LINC00477 siRNA对miR-128表达水平的影响。如图所示。GydF4y2Ba4.GydF4y2BaF,LINC00477过表达明显降低miR-128水平(折叠变化0.32 V.S.1,LINC00477 V.S. Vector,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba < 0.01), and LINC00477 siRNA significantly increased miR-128 expression in granulosa cells (Fold change 2.79 v.s. 1, si- LINC00477 v.s. si-NC,P.GydF4y2Ba< 0.001)。最后,采用双荧光素酶报告基因试验和RNA下拉实验来评估LINC00477和miR-128之间的直接靶向关系。如图所示。GydF4y2Ba4.GydF4y2Bag, miR-128模拟物显著降低了LINC00477 wt转染细胞的荧光素酶活性(相对流感/Rlu 0.34 vs . 1, miR-128模拟物vs . miR-128 NC,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001),但对LINC00477 mut转染细胞的荧光素酶活性没有显著影响(Relative Flu/Rlu 1.02 vs . 0.98, miR-128 mimics vs . miR-128 NC,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba> 0.05)。另一方面,RNA下拉实验结果显示,与生物素-nc组相比,生物素- mir -128显著提高了LINC00477的表达(Fold change 0.31 vs . 0.11, biotin-NC vs .生物素- mir -128,图。GydF4y2Ba4.GydF4y2Bah,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)。这些结果表明,LINC00477可以直接靶向miR-128。GydF4y2Ba

LINC00477通过靶向miR-128来调节颗粒细胞增殖和细胞凋亡GydF4y2Ba

最后,我们将LINC00477过表达质粒和miR-128模拟物共转染颗粒细胞,检测细胞增殖和凋亡情况。如图所示。GydF4y2Ba5.GydF4y2Baa,与LINC00477过表达组相比,miR-128模拟物通过促进48(OD 490 0.56 v.s. 1.01, LINC00477 + miR-NC v.s. LINC00477 + miR-128,图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba一个,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)和72 h (OD 490 0.89 v.s. 1.38, LINC00477 + miR-NC v.s. LINC00477 + miR-128,图。GydF4y2Ba5.GydF4y2Ba一个,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)和抑制凋亡(凋亡率22.56 v. 16.14, LINC00477 + miR-NC v.s. LINC00477 + miR-128,图。GydF4y2Ba5.GydF4y2BaB和C,GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01)。GydF4y2Ba

图5.GydF4y2Ba
figure5GydF4y2Ba

LINC00477通过靶向miR-128抑制PCOS细胞增殖,促进PCOS细胞凋亡。GydF4y2Ba一种GydF4y2BaMTT法测定颗粒细胞的增殖。GydF4y2BaB.GydF4y2Ba流式细胞术检测颗粒细胞凋亡。*GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05, * *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.01。每个实验至少重复3次。*GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.05, * * *GydF4y2BaP.GydF4y2Ba< 0.001GydF4y2Ba

讨论GydF4y2Ba

本研究探讨了LINC00477在PCOS中的作用及其机制。我们发现,LINC00477可能通过调节miR-128的表达,抑制颗粒细胞增殖,增加颗粒细胞凋亡,从而促进PCOS。GydF4y2Ba

在以前的许多研究中讨论了LNCRNA在PCOS中的角色。例如,朱等人。建议,LNCRNA ZFAS1的敲低增加了颗粒细胞增殖并抑制PCOS中的细胞凋亡[GydF4y2Ba18GydF4y2Ba]。刘等。发现LNCRNA PVT1 / microRNA-17-5P / PTEN轴调节E2和P4分泌和颗粒细胞增殖和PCOS的细胞凋亡[GydF4y2Ba14GydF4y2Ba]。Chen等发现lncRNA HCP5在人颗粒样肿瘤细胞系KGN中通过miR-27a-3p/IGF-1轴促进细胞增殖,抑制细胞凋亡[GydF4y2Ba19GydF4y2Ba]。LINC00477是最近发现的一种lncRNA, Zhao等报道了LINC00477在胃癌中的作用[GydF4y2Ba16GydF4y2Ba]。在最近的测序分析中,LINC00477被确定为PCOS患者中上调幅度最大的lncrna之一[GydF4y2Ba17GydF4y2Ba];然而,该结果尚未使用大量临床样本进行验证。在这项研究中,我们观察到PCOS患者血清中的LINC00477表达增加,这与测序结果一致。有趣的是,ROC分析结果表明,LINC00477血清水平可敏感地区分PCOS患者免受健康对照患者。此外,我们还确认了PCOS动物模型中LINC00477的过表达。在一起,这些数据表明LINC00477在PCOS上上调。但是,潜在机制仍需要进一步调查。GydF4y2Ba

异常颗粒细胞凋亡是多囊卵巢综合征发生的重要原因[GydF4y2Ba20.GydF4y2Ba那GydF4y2Ba21GydF4y2Ba那GydF4y2Ba22GydF4y2Ba]。在本研究中,我们发现过表达LINC00477抑制了颗粒细胞的增殖和凋亡。而LINC00477基因敲除则表现出相反的效果。这些结果提示,LINC00477可能成为一种潜在的靶向治疗多囊卵巢综合征的新疗法。GydF4y2Ba

在以往的研究中,lncRNAs和miRNAs之间的相互作用被认为是lncRNAs通过“海绵”和沉默靶miRNAs来发挥其生物学功能的最常见的潜在机制[GydF4y2Ba23GydF4y2Ba那GydF4y2Ba24GydF4y2Ba那GydF4y2Ba25GydF4y2Ba]。随着生物信息学的发展,可以通过多种方法预测lncrna的靶标mirna。我们使用在线工具starBase 3.0, miR-128被鉴定为LINC00477的靶标miRNA。我们发现miR-128是LINC00477的靶标。因此,我们推测LINC00477可能通过下调miR-128的表达来参与PCOS。为了验证这一假设,我们进行了一系列实验。首先,检测患者血清中miR-128的表达水平,我们确认PCOS患者血清中miR-128与LINC00477水平呈负相关;PCOS小鼠卵巢和血清中miR-128表达下调,与PCOS患者血清中miR-128表达规律一致。此外,LINC00477和miR-128之间的直接靶向关系也被双荧光素酶报告试验和RNA下拉试验证实。有趣的是,细胞实验结果表明,miR-128模拟物部分消除了过表达质粒LINC00477对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。 Taken together, these results demonstrated that upregulation of LINC00477 may facilitate the development of PCOS by decreasing miR-128 expression.

总之,我们首次报道了LINC00477通过调节miR-128表达来调节颗粒细胞的增殖和凋亡。我们的数据建议瞄准LINC00477 / MIR-128轴可以代表处理PCOS的潜在方法。GydF4y2Ba

数据和材料的可用性GydF4y2Ba

本研究中产生或分析的所有数据均包含在本发表的文章中,或根据合理要求从通讯作者处获取。GydF4y2Ba

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利益冲突GydF4y2Ba

作者声明没有利益冲突。GydF4y2Ba

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本研究由厦门市科技计划指导项目(项目编号:3502Z20189049)资助。GydF4y2Ba

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贡献GydF4y2Ba

海杰高展出了大部分实验,并写了稿件,金娜江,莹莹施,济英陈和李佳赵表演了一些实验。陈望设计了这项研究,修订了稿件并提供了资金。作者读并批准了最终的稿件。GydF4y2Ba

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对应到GydF4y2Ba陈鸿王GydF4y2Ba。GydF4y2Ba

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本研究经南方医科大学深圳医院伦理委员会批准。每位患者均获得知情同意。GydF4y2Ba

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高洪,蒋军,石勇。GydF4y2Baet al。GydF4y2BaLINC00477/miR-128轴通过调节卵巢颗粒细胞增殖和凋亡促进多囊卵巢综合征的进展。GydF4y2Ba饲养Biol内分泌GydF4y2Ba19,GydF4y2Ba29(2021)。https://doi.org/10.1186/s12958-021-00718-z.GydF4y2Ba

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